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産品名稱 |
産品編號 |
規格 儲存 |
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Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) |
PH |
欧美成人精品A片免费一区99 -20℃ |
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5 X M-MLV buffer |
PHb |
1 mL -20℃ |
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10 mM dNTP |
PHd |
250 μL -20℃ |
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Oligo (dT)18 (50 μM) |
PH |
℃ |
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Random Primers N6 (25 μM) |
PHb |
250 μL -20℃ |
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RNase Inhibitor |
PHd |
成人做爰高潮A片免费视频℃ |
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RNase free ddH2O |
PHd |
1 mL x 2 -20℃ |
産品描述：
LSC ® I 1st Strand cDNA Synthesis Kit 是基于LSC ® I Reverse Transcriptase 开发的反转录试剂盒。具有较好的热稳定性，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA 模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。
试剂盒中包含由总RNA 或mRNA 合成高质量第一鏈cDNA 所需的所有成分，并提供两种cDNA 合成引物：Random Primers N6 和oligo (dT)18，合成的单链cDNA 产物可直接用来进行后续PCR 或者qPCR 反应。
第一鏈cDNA 合成操作步驟 （10μL）
1) 离心管中配制下列模板RNA/引物混合液，总量6 μL。
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組分 |
使用量 |
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模板RNA 引物1（10 μM） |
1 ng-1 μg*
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Oligo (dT)18（50 μM）a |
1 μL |
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或Random Primers N6 (25 μM) b
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或 Gene Specific Primers (10 μM) |
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RNase free ddH2O |
to 6 μL |
* Total RNA的使用量一般为1 ng-1 μg；mRNA的使用量一般为10 pg-1 μg。
a 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18 ，与真核生物mRNA 的3’ Poly A 尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
b 原核生物RNA的逆转录建议选择Random Primers N6 或者Gene Specific Primers，Random Primers N6 适用性较广，mRNA、rRNA、tRNA、small RNA 和LncRNA 等模板均可用Random Primers N6 进行。
2) 70℃ 保温10分钟后迅速在冰上急冷2分钟以上。
3) 离心数秒钟使模板RNA/引物的变性溶液聚集于离心管底部。
4) 在上述离心管中配制下列逆转录反应液。
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組分 |
使用量 |
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上述模板RNA/引物變性溶液 引物1（10 μM） |
6 μL |
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5 X M-MLV buffer |
2 μL |
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10 mM dNTP |
0.5 μL |
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RNase Inhibitor (40 U/μL) |
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M-MLV (200 U/μL) |
0.25 -1 μL*
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RNase free ddH2O |
to 10 μL |
* 当起始模板RNA量＞500 ng时，M-MLV的使用量应＞0.25 μl。
5) 42℃保溫1小時*。
* 以Random Primers作为反转录引物时应先进行30℃，10分鍾反應，然後再在42℃條件保溫1小時。
6) 70℃保温15分钟后冰上冷却，得到的cDNA溶液可直接用于2nd-Strand cDNA的合成或者PCR扩增等，PCR扩增时建议cDNA溶液稀释5倍后使用。
